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          公司新聞
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          內毒素的去除方法

          來源:純水設備??????2020/4/5 10:26:53??????點擊:

          蘇州水處理設備http://www.topvideoporn.com

          器皿中內毒素的去除:

          a.干熱法

          ? 適用對象:耐熱物品如玻璃制品、金屬制品等生產過程中所用的容器
          ? 處理方法: 180℃3~ 4h 或 250℃ 30min~ 2h
          ? 注意事項
          ? 1.在干烤前,被加熱的玻璃器皿上最好不要有水珠,否則可能會使玻璃器皿損壞。
          ? 2.烘烤結束后,玻璃器皿不要馬上從電熱烘箱中拿出,要等溫度適度降低之后才可以拿出,以免因溫差太大而造成玻璃器皿損壞。
          ? 3.器皿上不能含有紙質或塑料制品,以免烘烤時燃燒或熔化。

          b.化學降解法

          ? 適用對象:主要用于去除玻璃、塑料和其它高分子材料器皿上的內毒素。

          ? 處理方法:常用3~5%雙氧水、重鉻酸鉀硫酸清潔液(重鉻酸鉀∶硫酸∶水常用配比1∶1∶10 或1∶2∶8 )、0.1M HCl或0.1 M NaOH浸泡去除。一般處理4h以上。

          ? 注意事項:佩戴防護用具,防止皮膚直接接觸。

          溶液中內毒素的去除

          方法

          原理

          優點

          缺點

          液相分離法

          一些去污劑,如Triton X-114,脫氧膽酸鈉能夠和內毒素的脂質部分結合,通過液相分離的方法萃取內毒素從而使后者有效地去除。

          對內毒素的去除率高,且不影響有效成份的活性。該法簡單高效、價格低廉、適合大規模應用,在我們日常的蛋白純化中較為常用。

          去內毒素后的樣品會有微量去污劑的殘留。

          分子篩法

          分子篩是利用凝膠的網狀結構,根據分子大小進行分離的一種方法。由于蛋白質和內毒素的分子量有較大差別,因此利用分子篩可以有效去除內毒素。

          去除效果明顯

          每次處理量小,處理時間較長。

          離子交換色譜法

          當溶液pH2時,內毒素帶有負電荷。因此內毒素與陰離子交換介質QDEAE Sepharose Fast Flow有較強結合。柱上的內毒素可在洗脫目標蛋白后用高鹽緩沖液或NaOH去除。

          成本低,吸附容量大

          但不適合于溶液中存在其它帶負電荷物質的情況。

          親和色譜法

          將適當的配基固載于色譜基質上合成出親和介質,使它特異性結合內毒素。GenScript將多粘菌素BPMB)偶聯于Sepharose FF 上,以此介質特異性吸附內毒素。

          高效能、高選擇性

          相對成本較高。

          超濾法

          由于內毒素具有較大的相對分子質量,因此可選用超濾膜去除溶液中的內毒素。

          操作簡單,處理量大

          操作過程中的壓力較高。 不適合含有較大相對分子質量成份的樣品。因為在除去熱原的同時會阻留或吸附樣品中的有效成份,使產品收率大受影響。

          吸附法

          活性炭用于去除內毒素是由于內毒素的相對分子質量較大。適合于組分較為簡單的小分子的溶液中或水中去除內毒素。活性炭常用量為0.1%0.5%

          成本低,處理量大。

          活性炭的選擇性較差,易吸附有效成份,純化后溶液中的殘余活性炭不易去除,且自身可能含有的重金屬造成樣品污染,因此目前很少使用

          蒸餾法

          此方法可用于生產去熱源水,作為注射用水或洗滌水。

          去除效果明顯

          成本較高

          疏水層析法

          內毒素的脂肪A 部份有很強的疏水性, 但在高鹽下會凝集, 無法掛上疏水層析柱。因此可選擇能結合目標蛋白的疏水介質去除內毒素

          適用于高鹽濃度的樣品

          目前技術不夠成熟,還需要進一步探索


          但是,各種去內毒素的方法不是孤立的,可以相互結合使用。 比如,如果液相分離法得到的蛋白內毒素水平未達標,可以接著利用分子篩法進一步去除內毒素。

          作為目前去內毒素常用的方法,液相分離法的注意事項值得我們重視

          1.液相分離方法應用于蛋白純化中內毒素的去除

          a.目的蛋白上樣后,用預冷的基礎溶液+1% Triton X-114緩慢淋洗柱子,直至A280數值穩定不變;
          b.用預冷的去內毒素基礎溶液淋洗柱子,直至A280數值達到基線,穩定不變;
          c.用各梯度去內毒素的洗脫液洗脫,收集各洗脫液于去內毒素的收集管中。
          d.此方法適用廣泛,如我們常用Ni柱、GST柱和離子交換柱等純化。
          e.純化過程應盡量在潔凈的環境下進行,純化時間不宜過長。
          f.所用的吸管、槍頭等器材應為經去內毒素處理的。

          2.液相分離法應用于大量樣品中內毒素的去除

          a.在大量蛋白樣品中加入終濃度為 1% 的Triton X-114 ,充分混勻 ,冰浴 5min ,使之成為一相 ;
          b.升溫超過其濁點 21 ℃,37 ℃孵育 ,觀察分層情況;
          c.待溶液中出現明顯分層后 ,室溫下 12000r/min ,離心5min ,吸取上清液 ;
          d.為達到較好的去除效果,可以重復 2 次。
          e.如果樣品內毒素含量較高,可以提高Triton X-114濃度至2%。
          f.如果升溫至37 ℃后,分層不明顯或比較慢,可以升溫至56 ℃孵育。
          g.本方法不適用于去除膜蛋白中的內毒素. 實驗室純水設備工業純水設備, 蘇州水處理設備醫用GMP純化水設備醫用水處理設備


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